关于用碱性过硫酸钾做标准曲线的经验总结

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查看1826 | 回复31 | 2022-3-12 19:12:45 来自手机 | 显示全部楼层 |阅读模式
1、空白值问题: 国标碱性过硫酸钾,做低浓度水样时总氮空白吸光度值要求不超过0.03 。
2、空白水样的吸光度是多少?
一般是在0.020左右 220nm时空白在0.2左右,275nm时空白在0.02左右,如果不在这个范围内,多半是过硫酸钾的原因。我们用国内优级纯的过硫酸钾,220nm时空白在3点多,275nm时空白在0.5左右。换了进口的德国默克的过硫酸钾,220nm时空白在0.123左右,275nm在0.055左右,空白试验校正吸光度0.02<0.03,符合标准。为什么说国内优级纯的过硫酸钾有问题,纯度不够,因为我将国内优级纯的过硫酸钾重结晶了。过程如下:
1、过硫酸钾问题验证: 在40 ℃(不能超过60°C,否则过硫酸钾会失效)水浴条件下缓慢溶解过硫酸钾直到饱和无法再溶后,取出溶解过硫酸钾的广口瓶,取清夜放至室温,移入4 ℃冰箱内放置一晚上,同时用4 ℃冷藏一大瓶蒸馏水冲洗2~3次,如此重结晶2~3次后用鼓风干燥箱烘干即可,此过程为过氯酸钾重结晶,相当麻烦,而且过硫酸钾的回收率很低,试剂浪费严重。最后用重结晶的过氯酸钾重新配药剂,其他都没变,空白值220nm处的吸光度直接掉到0.28,275nm处吸光度直接掉到0.05,但是空白试验校正吸光度0.18>0.03,现在我知道了,问题就是出在过硫酸钾上了,虽然是优级纯的,但是纯度还是不够。第二天又重新做,换了进口药品,空白值做出来了,但是标准曲线R²只有0.995,依然不符合要求,最后问题找在了25ml的比色管上,7只比色管10ml和25ml的刻度线好几个都没有在一条线上,也就是刻度线不一样高,造成的结果就是加的蒸馏水多少不一样,造成曲线只有2个9,配合刻度线一样高的比色管,最后标准曲线做出来了,试验空白校正吸光度0.013<0.03,R²=0.9996。
2、测定的问题: 水中总氮项目的测定常采用碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法。采用这种方法的优点是步骤相对简单,所需试剂较少,要求使用的仪器设备一般实验室都能具备。但是该方法对空白值的要求非常严格,其所需试剂中的过硫酸钾、氢氧化钠本身都含有一定量的氮,因此空白实验不好做。要做好总氮的空白实验,不仅与试剂有关,而且还与实验用水、器皿、医用手提蒸气灭菌器的压力、实验室环境及方法步骤的掌握、比色管刻度线的准确度有关因素关系密切。
3、以下几个测定总氮过程中应注意的问题:
(1)试剂的配制、存放: 碱性过硫酸钾的配制过程十分重要,掌握不好,会影响消解效果,对测定结果产生一定的影响。HJ636-2012中关于碱性过硫酸钾的溶解有明确要求,可以置于50℃的水浴中加热溶解,另称取氢氧化钠使之溶解,待氢氧化钠溶液温度降到室温后再加入过硫酸钾溶解。过硫酸钾的存放也要注意,应避免与还原性物质、硫、磷等混合存放,另外,过硫酸钾易吸潮,放出氧气,因此,为防止失效,要将其放在干燥的试剂橱中。
(2)无氨水的制备: 实验过程对水的要求非常严格,普通的蒸馏水往往还达不到实验要求。这时需再做二次加工以得到无氨水。在用蒸馏法制备无氨水时, “弃去前50ml馏出液,然后将馏出液收集在带有玻璃塞的玻璃瓶中”。根据本人的实验,其实娃哈哈纯净水是可以做总氮的,只要药品好,桶装纯净水都可以做,我就是用桶装纯净水做的。如果想要4个9可以用蒸馏水做。
(3)实验室环境 :总氮的分析应在无氨的实验室环境中进行,室内不应含有扬尘、石油类及其它的氮化合物,绝对不能在分析氨氮等氮类项目的实验室中做总氮项目的分析,所使用的试剂、玻璃器皿等也要单独存放,避免交叉污染,影响空白值。
(4)玻璃器皿的洗涤: 所使用的玻璃器皿应先用(1 + 9)盐酸浸泡后,包括比色皿,移液管都得用盐酸泡。再用纯净水或者蒸馏水冲洗数次才能使用,否则,也会造成空白值偏高或平行性较差的情况。
(5)消解温度、压力的控制: 对于使用医用手提蒸气灭菌器的实验室,因测定压力为1. 1~1. 4kg/ cm2 ,温度为120℃~124℃,消解时, HJ636-2012中要求达到规定温度压力后即开始计时,我认为,达到规定温度压力后应当先放冷空气使压力表指针回零,再次达到规定温度压力后再计时30分钟。或者直接打开放气阀加热一段时间,待蒸气灭菌器内的冷空气被彻底赶尽、放出热蒸气后再关闭放气阀消解,并且将消解温度控制在120℃,直至消解30分钟后,断开电源。等压力指针自然回0,切不可消解30分钟后直接放气,不仅危险,而且内外压力不一样容易造成比色管内液体沸腾。
(6)比色时的注意事项: 该项目的测定涉及两个波长(220nm和275nm) ,有条件的实验室可采用双光路紫外分光光度计,其优点是方便快速、可以避免反复调整波长产生测量误差,皿间误差也能自动修正。如果没有双光路的光度计,建议在测定完一组样品的同一波长后,再调整到另一波长,统一测定,不要测完一个样品的两个吸光度后再换另一个样品,这样反复调整波长会引起一定的测量误差。
        以上是我做总氮时遇到的问题和查阅相关资料的总结,如有不当之处望大家指正,谢谢。
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多多 | 2022-3-13 07:46:56 来自手机 | 显示全部楼层
谢谢分享
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Secretariat | 2022-3-13 07:57:32 来自手机 | 显示全部楼层
经验总结是很重要的一个环节
绿水青山就是金山银山
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Mr涂 | 2022-3-13 08:12:26 来自手机 | 显示全部楼层
请问一下盐酸洗液怎么配的,是一份盐酸加9份蒸流水么
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741225561 | 2022-3-13 08:48:41 来自手机 | 显示全部楼层
Mr涂 发表于 2022-3-13 08:12
请问一下盐酸洗液怎么配的,是一份盐酸加9份蒸流水么

是😄
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站在原地,等 | 2022-3-13 10:02:11 来自手机 | 显示全部楼层
Mr涂 发表于 2022-3-13 08:12
请问一下盐酸洗液怎么配的,是一份盐酸加9份蒸流水么

是的,标准上说的清楚,如果要精确一点的是需要计算的哦,我感觉没必要,一份酸,九份蒸馏水就可以了。
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站在原地,等 | 2022-3-13 10:02:48 来自手机 | 显示全部楼层
Secretariat 发表于 2022-3-13 07:57
经验总结是很重要的一个环节

谢谢👌🏻👌🏻
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站在原地,等 | 2022-3-13 10:03:44 来自手机 | 显示全部楼层
多多 发表于 2022-3-13 07:46
谢谢分享

多谢大佬的肯定
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serenity61629 | 2022-3-15 20:03:17 来自手机 | 显示全部楼层
大神说的空白我不赞同,空白是要求0.030,空白一般220不能0.2那么大,275基本就应该是0.000,如果那么大应该检查还有什么问题,不然误差太大了
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serenity61629 | 2022-3-15 20:09:11 来自手机 | 显示全部楼层
大神说用蒸馏水要好,我建议还是用娃哈哈水或纯水,超纯水,这样经常是4个九
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